لینک دانلود و خرید پایین توضیحات
فرمت فایل word و قابل ویرایش و پرینت
تعداد صفحات: 3
مقدمه‌ای بر استخراج DNA
اولین قدم در تحقیقات ژنتیک مولکولی و مهندسی ژنتیک جداسازی و خالص‌سازی DNA و RNA می‌باشد. به دلیل اینکه حیوانات به مدت زیادی درون گله‌های انتخاب شده باقی نمی‌مانند از اینرو بکارگیری بهترین روش استخراج DNA جهت بدست آوردن رشته‌های DNA بزرگ و خالص، که بتواند DNA استخراج شده را در مراحل بعدی آزمایشات و در سالهای بعد هم در اختیار قرار دهد ضروری بنظر می‌رسد. اهمیت استخراج DNA در این است که یک روش سریع و قابل اعتمادی برای تولید خوبی از DNA با وزن مولکولی زیاد و خالص از نمونه‌های اخذ شده در دسترس باشد و برای فرآوری تعداد زیادی از نمونه‌ها جهت انجام آزمایشات بتوان از این روش استفاده گردد. روشهای معمول برای استخراج DNA از خون کامل شامل چندین مرحله عصاره‌گیری با فنل است ولی بخاطر اینکه فنل سمی بوده و استخراج DNA با فنل وقت‌گیر می‌باشد، روشهای جدید فنل را از مراحل استخراج DNA حذف کرده‌اند که در این روش‌ها استخراج DNA با استفاده از غلظت‌های نمکی متفاوت و حرارت صورت می‌گیرد و این روش‌ها تولید خوبی از DNA با وزن مولکولی بالا و مناسب برای هضم آنزیمی فراهم می‌آورند. باید توجه داشت که استخراج DNA از خون دامهای جراحی شده، دامهای موجود در اواخر آبستنی و دامهای کشتار شده کیفیت مناسبی نخواهد داشت که به دلیل پایین آمدن سلولهای سفید خون می‌باشد. امروزه دستورالعمل‌ها و کیت‌های مختلفی جهت استخراج DNA در بازار وجود دارد که مبتنی بر روشهای مختلف می‌باشند
مقایسه روشهای مختلف استخراج DNA از بافتهای حیوانی
امروزه برای شناسائی جهشهای موجود در سطح ژنوم پستانداران میتوان از تکنیکهای مختلفی همچون روشهای مبتی بر PCR از جمله Microsatellite، SSCP، AFLP، RFLP، DGGE و ARMS استفاده نمود. این تکنیکها عمدتاً برای نقشهیابی ژنها، تشخیص ژنوتیپهای مختلف یک ژن مطلوب و همچینین مطالعات جمعیتی و آزمون انساب استفاده می‌شود. مزیت انکارناپذیر این تکنیکها، تجریه و تحلیل سریع اطلاعات ژنوم در یک جمعیت با استفاده از مقادیر بسیار ناچیزی از DNA می‌باشد. بنابراین در قدم اول نیاز به استفاده از یک روش استخراج DNA که سریع و بیخطر و مقرون به صرفه باشد، همواره احساس می‌شود. چندین روش مختلف به منظور حداقل کردن مراحل استخراج DNA، توسط محققان مختلف گزارش شده است. در این تحقیق اقدام به مقایسه روشهای مختلف استخراج DNA از خون، شیر، ریشه مو و اسپرم گردیده است. کیفیت و کمیت استخراج با دو روش اسپکتوفتومتری و ژل مونتیورینگ مشخص شده و سپس برای ارزیابی کیفیت DNA استخراج شده، تکنیک RAPD با استفاده از آغازگر تصادفی OPU13 و RFLP با استفاده از آغازگرهای اختصاصی 24 جفتبازی طراحی شده برای تکثیر 422 جفت باز از اینترون 2 ژن لپتین و با استفاده از آنزیم برشی Sau3AI صورت پذیرفت. تجریه و تحلیل آماری در نهایت نشان داد که روش سیلیکا ژل روشی مناسب و کم هزینه برای استخراج DNA از سلولهای مختلف پیشنهاد می‌گردد...
استخراج DNA به روش نمکی و فنل-کلروفورم-ایزوآمیل الکل
در این روش در ابتدا نسبت به تهیه محلولهای مورد نیاز در غلظت بالا اقدام می‌شود تا اینکه مجبور نباشیم هر دفعه نسبت به تهیه آنها اقدام کنیم. محلولهای با غلظت بالا معمولا Stock نامیده می‌شوند. سپس بسته به غلظت مورد نیاز و توسط فرمولهایی که در قسمت تهیه محلولها شرح داده شده است نسب به تهیه غلظت مورد نیاز اقدام می‌گردد. در این روش ابتدا محلولهای مورد نیاز برای لیز کردن سلولها و سپس مراحل استخراج شرح داده می‌شود. ...
آماده سازی فنل برای استخراج DNA (تقطیر و اشباع فنل)
فنلی که در بازار وجود دارد بصورت کریستال است که باید طی مراحلی تقطیر شده و اشباع گردد تا جهت استخراج DNA مورد استفاده قرار گیرد. چون مولکولها و کریستالهای فنل سنگین است از دستگاههای پیچ در پیچ عبور نمی‌کند و باید دستگاه تقطیر ساده مورد استفاده قرار گیرد. فنل کریستال را در بالون حرارتی ریخته و حرارت می‌دهیم تا ذوب شود که در دمای 68 درجه سانتیگراد بصورت مایع در می‌آید که پس از ذوب شدن حدود یک سوم حجم فنل، آب مقطر اضافه می‌کنیم. به مخلوط حرارت می‌دهیم تا آب داخل فنل تقطیر شود که در اینصورت ناخالصیهای شیری رنگی خارج می‌گردد. پس از خارج شدن قطرات شیری رنگ حالت سکون به محلول بر می‌گردد که در این موقع آب گرم را در دستگاه تقطیر به جریان انداخته و حرارت شعله را زیاد می‌کنیم تا فنل تقطیر شود و در دستگاه تقطیر بصورت کریستال در نیاید که این امر در 180 درجه سانتیگراد انجام می‌گردد.
دانلود مقاله کامل درباره آماده سازی فنل برای استخراج DNA
