دانلود مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac

اختصاصی از فایلکو دانلود مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

مشخصات این فایل
عنوان:بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac
فرمت فایل: word(قابل ویرایش)
تعداد صفحات:62

این مقاله در مورد بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac می باشد.

 

بخشی از تیترها به همراه مختصری از توضیحات هر تیتر از مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac

- آگارز MP
3- تانک الکتروفورز افقی
روش:
ابتدا آگارز MP در بافر TBE(0.5x) را بکمک حرارت حل کرده و ژل آگارز افقی را سینی مخصوص تانک الکتروفورز افقی تهیه می نمائیم. سپس به مقدار Ml5 از DNA کروموزومی را در چلهک ژل ساخته شده ریخته و در تانک الکتروفورز حاوی بافر TBE(0.5x) پس از برقراری جریان الکتریکی مستقیم الکتروفورز می کنیم....(ادامه دارد)

روش تهیه Competent Cell
100 میلی لیتر از محیط SOB را در یک ارلن یک لیتری تهیه کرده و اتوکلاو می نمائیم. به محیط فوق 1 میلی لیتر از کشت 18 ساعت
) E.col.(DH5را تلقیح می نمائیم. ارلن را برروی شبکه قرار داده و با دور rpm200 در دمای ⁰C37 قرار داده تا OD₅₅₀nm به حدود 5/0 برسد. ارلن محتوی باکتری را بمدت نیم ساعت در یخ قرار داده و پس از آن بندت 10 دقیقه در دمای ⁰C4 در rpm1800 سانتریفوژ می کنیم....(ادامه دارد)

- غربالگری
باکتریهای رشد یافته پس از ترانسفورماسیون در محییط نوترین برات آنتی بیوتیک کشت داده و پس از حدود 18 ساعت که کدورت محیط مناسب شد، پلامیت آنها را تخلیص می کنیم. پلاسمیدهیا تخلیص شده را برروی ژل آگارز 1% بررسی می نمائیم. پلاسمیدهائی که حاوی ژن مورد نظر باشند، حرکت...(ادامه دارد)

- خالص سازی پروتئین L₇/L₁₂ با استفاده از Ni:NTA:
جداسازی پروتئینهای دارای دنباله 6 اسید آمینه هیستیدین با استفاده از تکنولوژی Ni-NTA براساس کروماتوگرافی تمایلی انجام می گردد. نیتروتری استیک اسید (Nitrilo triacotic Acid) NTA دارای 2 جایگاه آزاد برای میان کنش با 6 his-tag میباشد. NTA به یونهای فلزی مانند Ni²⁺ با پایداری بالایی مکتصل شده و شرایط سخت شستشو نیز موجب جداشدن یونها از آن نمی گردد....(ادامه دارد)

- دیالز پروتئین:
از سیستم دیالیز برای تعویض بافر پروتئینهای خالص شده استفاده میشود. بدین منظور پروتئین از یک غشاء نیمه تراوا دارای منافذی با اندازه های مناسب عبور داده میشود. در این مرحله سلولهایی که بزرگتر از منافذ غشاء هستند، داخل کیسه دیالیز باقیمانده و پروتئینهای کوچکتر و یونها از غشاء عبور کرده و وارد فضای بیرون کیسه دیالیز میشوند.

بخشی از فهرست مطالب مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac در پایین آمده است.

-جداسازی کروموزوم بروسلا آبورتوس 19S:
2- آگارز MP
3- تانک الکتروفورز افقی
روش:
-تائید ژنوم سنتز شده توسط PCR:
-کلونینگ ژنهای L7/L12 و P39 در کلونینگ pSK+:
-هضم آنزمی پلاسمید sPK:
-هضم آنزیمی ژنهای L7/L12 و P39:
ترانسفورماسیون
-غربالگری
...(ادامه دارد)