فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)
تعداد صفحات:92
پایان نامه جهت اخذ درجه کارشناسی ارشد در رشته زیست شناسی- ژنتیک
فهرست مطالب:
فصل اول: مقدمه وکلیات
1-1- مقدمه 2
2-1-کلیات تحقیق 3
1-2-1-دیابت 3
2-2-1- انواع دیابت 3
3-2-1- علائم بروز دیابت 4
4-2-1- درمان دیابت : 5
3-1- گیاه جغجغه ((Prosopis farcta 8
1-3-1- خواص دارویی جغجغه 8
4-1- فسفوفروکتوکیناز 1(PFK-1): 9
5-1- ضرورت و اهداف تحقیق : 13
فصل دوم: مروری بر منابع
1-2- اثرات ضد دیابتی گیاهان 16
1-1-2- انار 17
2-1-2-مکانیسم اثر انار در دیابت: 17
2-1-2- سیر 19
2-2- اثر گیاه برفعالیت وبیان ژن 21
فصل سوم: مواد و روشها
1-3- موادو روشها 25
2-3- تهیه عصاره هیدروالکلی برگ گیاه جغجغه 27
3-3- حیوانات آزمایشگاهی 28
1-3-3- نحوه گروهبندی: 28
2-3-3- روش القای دیابت تجربی: 29
3-3-3- اندازه گیری قند و وزن موشها: 29
4-3-3- مراحل انجام تشریح: 29
4-3- بررسی بیان ژن 31
1-4-3- مشخصات توالی ژن PFK-1 31
2-4-3- طراحی پرایمرها 35
3-4-3- آماده سازی پرایمر 35
5-3- استخراج RNA: 36
1-5-3- استخراج RNA از نمونه های تازه کبد توسط کیت Geneall Hybrid Rtm 36
1-5-3- بررسی کمیت و کیفیت RNA استخراج شده 38
6-3- سنتز cDNA 39
1-6-3- سنتز cDNA توسط کیتThermo SCIENTIFIC 39
7-3- واکنش های PCR 41
1-7-3 - PCR شیب دمایی 41
2-7-3- PCR معمولی 43
8-3- الکترفورز 45
1-8-3 - مواد مورد نیازجهت تهیه ژل الکتروفورز 45
1-1-8-3- آگارز 45
2-1-8-3- اتیدیوم بروماید 46
3-1-8-3- لودینگ بافر 46
4-1-8-3-طرز تهیه محلول Tris-Hcl 46
4-1-8-3- شناساگرهای اندازهDNA 47
9-3- روش کار با ژل الکترفورز 47
10-3- رسم منحنی استاندارد: 48
10-3- واکنش Real-Time PCR 48
11-3- Threshold و مقدار CT: 50
12-3- تعیین توالی محصولات (Direct Sequencing) PCR 51
10-2-3- آنالیز بیان ژن 52
13-3- تجزیه وتحلیل داده ها 52
فصل چهارم: نتایج و بحث
1-4- جمع آوری نمونه : 54
2-4- بررسی نتایج وزن موشهای مورد مطالعه 54
3-4- بررسی نتایج گلوکز ناشتای سرم موشهای مورد مطالعه 56
5-4- نتایج استخراج RNA: 57
6-4- نتایج حاصل ازساخت cDNA بر روی ژل آگاروز 59
7-4- نتایج تعیین غلظت و کیفیت RNA توسط اسپکتروفتومتری 61
1-7-4- نتایج مربوط به PCR شیب دمایی 61
8-4- نتایج منحنی استاندارد 62
1-8-4- منحنی استاندارد ژن TBP 63
2-8-4-منحنی استاندارد ژن PFK-1 63
9-4- نتایج واکنش Real Time PCR 64
1-9-4- تکثیر ژنPFK 65
2-9-4-تکثیر ژن TBP 66
10-4- ارزیابی کارایی تکثیر ژنهای مور مطالعه از طریق آنالیز منحنی ذوب: 66
1-10-4- منحنی تغییرات ذوب بر حسب دمای ژن PFK 67
2-10-4-منحنی تغییرات ذوب بر حسب دمای ژن TBP 67
11-4- آنالیز منحنی ذوب ژن PFK 68
12-4-آنالیز منحنی ذوب ژن TBP 68
13-4- نتایج حاصل از Real timePCR ژن PFK 1 بر روی ژل آگارز 70
14-4- نتایج بررسی بیان ژن PK 70
15-4- بحث: 71
16-4- پیشنهادات 73
منابع: 75
فهرست جداول
جدول1-3- تجهیزات و دستگاهها 26
جدول 2-3 پرایمرهای طراحی شده 35
جدول3-3- لیست اجزای کیت استخراج RNA 36
جدول 4-3 موادلازم برای PCR 42
جدول 5-3 برنامه PCR شیب دمایی برای تکثیر قطعه حاصل از TBP 42
جدول 6-3 برنامه PCR شیب دمایی برای تکثیر قطعه حاصل از PFK-1 43
جدول7-3 مواد مورد نیاز برای تهیه بافر Tris-Hcl 47
جدول8-3 مواد و میزان مورد نیاز برای یک واکنش در Real-Time PCR 49
جدول9-3 مراحل، دما و زمان مربوطه در یک واکنش Real- time PCR برای ژن TBP 50
جدول10-3- شرایط دمایی و زمانی واکنش Real time PCR برای ژن PFK-1 50
فهرست اشکال
شکل 1-1- محل قرارگرفتن فسفوفروکتوکیناز 1 در کروموزوم شماره 21 انسان 10
شکل2-1- فروکتوز 2-6 بی فسفات مهمترین فعال کننده آنزیم فسفوفروکتوکیناز 1 11
شکل3-1- مراحل گلیکولیز 12
شکل 1-3- نحوه گاواژ دادن عصاره 28
شکل 2-3- تشریح موشها 30
شکل 3-3- توالی ژن pfk-1 34
شکل 4-3- دستگاه اسپکتوفتومتری 39
شکل 5-3 دستگاه PCR (Eppendorf –mastercyc gradient) 44
شکل 6-3 دستگاه الکتروفورز وعکس ژل 48
شکل 7-3 دستگاه Real-Time PCR 49
شکل 1-4- فراوانی موشهای مورد مطالعه 54
شکل 2-4- اثر مصرف عصاره هیدروالکلی برگ گیاه جغجغه بر وزن موشهای صحرایی 55
شکل 3-4- اثر مصرف عصاره هیدروالکلی برگ گیاه جغجغه بر گلوکز ناشتای موشهای صحرایی 57
شکل 5-4- نتایج استخراج Total RNA 59
شکل 6-4- تکثیر قطعه (bp190)مربوط به ژن PFK . 60
شکل7-4- تکثیر قطعه (bp126) مربوط به ژن TBP. 60
شکل 8-4- نتایج شیب دمایی PCR برای ژن PFK 61
شکل 9-4- نتایج شیب دمایی PCR برای ژن TBP 62
شکل 10-4- منحنی استاندارد ژن TBP 63
شکل11-4- منحنی استاندارد ژنPFK 64
شکل 12-4- منحنی تکثیرژن PFK. 65
شکل 13-4- منحنی تکثیرژن TBP 66
شکل 14-4 تغییرات فلورسانت بر حسب دما برای ژن TBP و PFK 68
شکل 15-4- منحنی ذوب ژن PFK و TBP 69
شکل 16-4- عکس ژل برای ژن PFK1 نتایج حاصل از real- tim PVR 70
شکل 16-4- تغییرات بیان ژن TBP 70
چکیده:
دیابت قندی یکی از مشکلات مهم پزشکی در همه کشورها می‌باشد. امروزه، درد و رنج انسان نه تنها در مورد این بیماری به خودی خود، بلکه شامل عوارض مرتبط با دیابت است. گیاهان نشان دهنده منبع عظیمی از مکمل¬های غذایی بالقوه مفید برای بهبود کنترل قند خون و جلوگیری از عوارض دراز مدت دیابت هستند. با توجه به تنوع گیاهان داروئی در ایران و با توجه به پتانسیل درمانی گیاهان داروئی و همچنین خطراتی که داروهای شیمیایی ممکن است در حال حاضر یا آینده برای بیماران ایجاد کنند، با بررسی تاثیر گیاهان دارویی در بیماری دیابت می¬توان راه¬های درمان مناسبی در پیش رو قرار داد.آنزیم فسفو فروکتوکیناز -1 از آنزیمهای سیتوزولی در مسیر گلیکولیز می باشد که نقش کلیدی در روند تنظیم گلیکولیز دارد.عوارض ناشی از نقص موروثی آنزیم pfk-1 در عضلات اسکلتی بصورت خستگی و کاهش توان حرکات عضلانی می باشد. در مواردی هم نقص آن باعث رشدسریع سلولهای سرطانی می شود. درتحقیق حاضر به تاثیر عصاره هیدر الکلی برگ گیاه جغجغه (با توجه به دارا بودن اثرات ضدالتهابی، ضد میکروبی و ضد دیابتی ) بر بیان ژن pfk-1در موشهای دیابتی نوع 1می پردازیم.
در این مطالعه 45 سر موش صحرایی نر به طور تصادفی در سه گروه شاهد سالم، شاهد دیابتی و دیابتی تحت تیمار تجویز عصاره جغجغه تقسیم شدند. با تزریق استرپتوزوتوسین (mg/kg 60) در موش¬های صحرایی نر (300-150 گرم) دیابت نوع 1 ایجاد شد.گروه دیابتی تحت تیمار به صورت روزانه (mg/kg 300) عصاره برگ گیاه جغجغه را به صورت گاواژ به مدت 30 روز دریافت نمودند. گروه شاهد سالم و شاهد دیابتی آب مقطر دریافت کردند. سپس در روز قبل از تجویز عصاره و روزهای 15 و 30 بعد از تجویز عصاره میزان گلوکز خون اندازه¬گیری شد و بیان ژن PFK-1 بافت کبدی توسط روش Real-Time PCR بررسی گردید. نتایج نشان داد گلوکز خون در روز 15کاهش می یابد اما بین گروه شاهد دیابتی و دیابتی تحت تیمار تفاوت معنی داری مشاهده نشد میزان بیان ژن PFK در گروه دیابتی تحت تیمار در روز 15 تفاوت معنی داری نسبت به شاهد دیابتی ندارد در بین گروهها تفاوت معنی داری برای بیان ژنPFK وجود ندارد. بنابراین تجویز عصاره هیدروالکی گیاه جغجغه بر بیان ژن فسفوفروکتوکیناز -1 در بیماران دیابتی نوع 1 بی تاثیر می باشد.
کلمات کلیدی: جغجغه، ژن فسفوفروکتو کیناز-1، دیابت نوع1
پایان نامه تاثیر عصاره برگ گیاه جغجغه( prosopis farcta)بر بیان ژن فسفوفروکتوکیناز-1در موش های صحرایی دیابتی (نوع1)
