فایلکو

مرجع دانلود فایل ,تحقیق , پروژه , پایان نامه , فایل فلش گوشی

فایلکو

مرجع دانلود فایل ,تحقیق , پروژه , پایان نامه , فایل فلش گوشی

دانلود مقاله کامل درباره آماده سازی فنل برای استخراج DNA

اختصاصی از فایلکو دانلود مقاله کامل درباره آماده سازی فنل برای استخراج DNA دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

لینک دانلود و خرید پایین توضیحات

فرمت فایل word  و قابل ویرایش و پرینت

تعداد صفحات: 3

 

مقدمه‌ای بر استخراج DNA

‌‌‌‌اولین‌ قدم‌ در تحقیقات‌ ژنتیک‌ مولکولی‌ و مهندسی‌ ژنتیک‌ جداسازی‌ و خالص‌سازی DNA و RNA می‌باشد. به‌ دلیل‌ اینکه‌ حیوانات‌ به‌ مدت‌ زیادی‌ درون‌ گله‌های‌ انتخاب‌ شده‌ باقی نمی‌مانند از اینرو بکارگیری بهترین‌ روش‌ استخراج DNA جهت بدست آوردن رشته‌های DNA بزرگ و خالص، که بتواند DNA استخراج‌ شده‌ را در مراحل‌ بعدی‌ آزمایشات‌ و در سالهای‌ بعد هم‌ در اختیار قرار دهد ضروری‌ بنظر می‌رسد. ‌‌‌‌اهمیت‌ استخراج DNA در این‌ است‌ که‌ یک‌ روش‌ سریع‌ و قابل‌ اعتمادی‌ برای‌ تولید خوبی‌ از DNA با وزن مولکولی‌ زیاد و خالص از نمونه‌های‌ اخذ شده در دسترس باشد و برای‌ فرآوری‌ تعداد زیادی از نمونه‌ها جهت‌ انجام‌ آزمایشات‌ بتوان از این روش استفاده گردد. ‌‌‌‌روش‌های‌ معمول‌ برای‌ استخراج DNA از خون‌ کامل‌ شامل‌ چندین‌ مرحله‌ عصاره‌گیری‌ با فنل‌ است ولی بخاطر اینکه فنل‌ سمی‌ بوده و استخراج‌ DNA با فنل‌ وقت‌گیر می‌باشد، روش‌های ‌جدید فنل‌ را از مراحل‌ استخراج DNA حذف‌ کرده‌اند که‌ در این‌ روش‌ها استخراج DNA با استفاده‌ از غلظت‌های‌ نمکی‌ متفاوت‌ و حرارت‌ صورت‌ می‌گیرد و این‌ روش‌ها تولید خوبی‌ از DNA با وزن‌ مولکولی‌ بالا و مناسب‌ برای‌ هضم‌ آنزیمی‌ فراهم‌ می‌آورند. ‌‌‌‌باید توجه‌ داشت‌ که‌ استخراج DNA از خون‌ دام‌های‌ جراحی‌ شده‌، دام‌های موجود در اواخر آبستنی و‌ دامهای کشتار شده‌ کیفیت‌ مناسبی‌ نخواهد داشت‌ که‌ به‌ دلیل‌ پایین‌ آمدن‌ سلولهای‌ سفید خون‌ می‌باشد. امروزه دستورالعمل‌ها و کیت‌های‌ مختلفی‌ جهت‌ استخراج DNA در بازار وجود دارد که‌ مبتنی‌ بر روشهای‌ مختلف‌ می‌باشند

مقایسه روشهای مختلف استخراج DNA از بافتهای حیوانی

امروزه برای شناسائی جهشهای موجود در سطح ژنوم پستانداران می‎توان از تکنیکهای مختلفی همچون روشهای مبتی بر PCR از جمله Microsatellite، SSCP، AFLP، RFLP، DGGE و ARMS استفاده نمود. این تکنیکها عمدتاً برای نقشه‎یابی ژنها، تشخیص ژنوتیپهای مختلف یک ژن مطلوب و همچینین مطالعات جمعیتی و آزمون انساب استفاده می‎شود. مزیت انکارناپذیر این تکنیکها، تجریه و تحلیل سریع اطلاعات ژنوم در یک جمعیت با استفاده از مقادیر بسیار ناچیزی از DNA می‎باشد. بنابراین در قدم اول نیاز به استفاده از یک روش استخراج DNA که سریع و بی‎خطر و مقرون به صرفه باشد، همواره احساس می‎شود. چندین روش مختلف به منظور حداقل کردن مراحل استخراج DNA، توسط محققان مختلف گزارش شده است. در این تحقیق اقدام به مقایسه روشهای مختلف استخراج DNA از خون، شیر، ریشه مو و اسپرم گردیده است. کیفیت و کمیت استخراج با دو روش اسپکتوفتومتری و ژل مونتیورینگ مشخص شده و سپس برای ارزیابی کیفیت DNA استخراج شده، تکنیک RAPD با استفاده از آغازگر تصادفی OPU13 و RFLP با استفاده از آغازگرهای اختصاصی 24 جفت‎بازی طراحی شده برای تکثیر 422 جفت باز از اینترون 2 ژن لپتین و با استفاده از آنزیم برشی Sau3AI صورت پذیرفت. تجریه و تحلیل آماری در نهایت نشان داد که روش سیلیکا ژل روشی مناسب و کم هزینه برای استخراج DNA از سلولهای مختلف پیشنهاد می‎گردد...

استخراج DNA به روش نمکی و فنل-کلروفورم-ایزوآمیل الکل

در این روش در ابتدا نسبت به تهیه محلولهای مورد نیاز در غلظت بالا اقدام می‌شود تا اینکه مجبور نباشیم هر دفعه نسبت به تهیه آنها اقدام کنیم. محلولهای با غلظت بالا معمولا Stock نامیده می‌شوند. سپس بسته به غلظت مورد نیاز و توسط فرمولهایی که در قسمت تهیه محلولها شرح داده شده است نسب به تهیه غلظت مورد نیاز اقدام می‌گردد. در این روش ابتدا محلولهای مورد نیاز برای لیز کردن سلولها و سپس مراحل استخراج شرح داده می‌شود. ...

آماده سازی فنل برای استخراج DNA (تقطیر و اشباع فنل)

فنلی که در بازار وجود دارد بصورت کریستال است که باید طی مراحلی تقطیر شده و اشباع گردد تا جهت استخراج DNA مورد استفاده قرار گیرد. چون مولکولها و کریستالهای فنل سنگین است از دستگاههای پیچ در پیچ عبور نمی‌کند و باید دستگاه تقطیر ساده مورد استفاده قرار گیرد. فنل کریستال را در بالون حرارتی ریخته و حرارت می‌دهیم تا ذوب شود که در دمای 68 درجه سانتیگراد بصورت مایع در می‌آید که پس از ذوب شدن حدود یک سوم حجم فنل، آب مقطر اضافه می‌کنیم. به مخلوط حرارت می‌دهیم تا آب داخل فنل تقطیر شود که در اینصورت ناخالصیهای شیری رنگی خارج می‌گردد. پس از خارج شدن قطرات شیری رنگ حالت سکون به محلول بر می‌گردد که در این موقع آب گرم را در دستگاه تقطیر به جریان انداخته و حرارت شعله را زیاد می‌کنیم تا فنل تقطیر شود و در دستگاه تقطیر بصورت کریستال در نیاید که این امر در 180 درجه سانتیگراد انجام می‌گردد.


دانلود با لینک مستقیم


دانلود مقاله کامل درباره آماده سازی فنل برای استخراج DNA
نظرات 0 + ارسال نظر
برای نمایش آواتار خود در این وبلاگ در سایت Gravatar.com ثبت نام کنید. (راهنما)
ایمیل شما بعد از ثبت نمایش داده نخواهد شد